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RT-PCR試劑盒使用注意事項

瀏覽次數:37發布日期:2021-08-06
  RT-PCR試劑盒反應就是從RNA反轉錄至cDNA,然后通過PCR反應擴增cDNA的過程。試劑盒采用了一步反應法完成整個RT-PCR反應,即RNA-cDNA-PCR反應操作在同一反應體系中進行,反應過程中不需增加額外的步驟,就可完成整個RT-PCR反應,同時整個反應系統且含有電泳時所需要的試劑,可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡捷、靈敏度高、重復性好的特點,可適用于各種動、植物、病毒RNA的PCR檢測。
  RT-PCR試劑盒備注:
  1.用戶可根據自己的情況調整優化PCR反應擴增參數:
  ·退火溫度:可根據實際情況適當地提高或降低退火溫度(50℃~65℃)。
  ·延伸時間:延伸時間因目的序列長度的不同而不同
  ·循環次數:cDNA量較少時,循環次數可增加為40~50次
  ·調整鎂離子的濃度
  2.用戶可根據本試劑盒提供的β-actin引物(陽性對照)驗證RT-PCR體系是否良好(選做):
  1.使用前每個組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;
  2.取滅過菌且無核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入。
  RT-PCR試劑盒使用注意事項:
  1.平臺效應:PCR不能進入平臺期,出現平臺效應與所擴增的目的基因的長度、序列、二級結構以及目標DNA起始的數量有關。故對于每一個目標序列出現平臺效應的循環數,均應通過單獨實驗來確定。
  2.防止DNA的污染:①采用DNA酶處理RNA樣品;②在可能的情況下,將PCR引物置于基因的不同外顯子,以消除基因和mRNA的共線性。
  3.RNA提取試劑盒:目前試劑公司有多種RNA提取試劑盒、cDNA試劑盒、PCR試劑盒以及RT-PCR試劑盒出售,其原理基本相同,但操作步驟不一。如果使用試劑盒,具體操作步驟請參照試劑盒說明書。
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